一文读懂核酸检测是怎样“揪出”病毒的

2022-12-16 来源:医药卫生网 - 医药卫生报  浏览:次  【查看证书

2019年底暴发的新型冠状病毒世界大流行,导致新冠病毒(2019-nCoV)把病毒这一概念深深印刻在每个人的脑海里。连3岁的孩童都知道做核酸检测能够“揪出”新冠病毒。那么,我们就来一起探究一下其中的奥秘吧。

首先,了解一下什么是核酸?核酸是生物的遗传物质,通常分为DNA和RNA两种,而新冠病毒的遗传物质就是RNA。不同种类的生物、同种生物的不同个体,核酸一般都是不同的。利用核酸的这一特点,我们可以用DNA来鉴定罪犯的身份,或者用来进行亲子鉴定。也可以通过检测人体内是否含有新冠病毒的RNA来确定是否被感染。

关于核酸检测:目前发展最快的领域是分子生物学技术,特别是与病毒学有关的领域。分子方法不依赖于活病毒样病毒分离程序的存在,他们检测病毒基因组的一部分,使它们对病毒的检测更加敏感。核酸扩增技术,包括PCR、核酸依赖性扩增检测技术(NASBA)和劳伦斯·利弗莫尔微生物检测阵列 (LLMDA)等已被证明是对大多数已知病毒进行快速检测和分子鉴定的技术领先者。PCR的扩增因子为106,是一种极其敏感的检测技术。如用于流感病毒检测的实时RT-PCR检测比终点检测提供更快的结果,并且在许多情况下具有等于或优于培养的灵敏度。Corman等人实现了通过针对新型冠状病毒2019-nCoV的RNA基因组两个片段的引物进行实时RT-PCR检测。我们常做的核酸检测是RT-PCR法,就是常见的咽拭子采集检测。一般程序如下:

①取样。这应该是大家最熟悉的环节,通常使用棉签取咽拭子进行检测,因为新冠病毒主要感染呼吸道及肺部,咽部存在病毒的可能性较大,且取样方便快捷。实际上,必要的时候,医生还可以通过鼻拭子、肛拭子,或者取痰液、支气管灌洗液等标本进行取样,以便于获得更准确的结果。

②提取病毒RNA。取样之后,会使用一些化学物质如苯酚等,杀死可能存在的病毒,再通过抽提、离心等方法将RNA提取出来。

③RT-PCR。RNA不够稳定,检测过程中容易被破坏,所以需要将其反转录为相应的cDNA。再进行PCR扩增不断提高cDNA浓度,以便于仪器检测。扩增过程中,会加入带荧光标记的特殊探针,这些探针能够特异性地与病毒的核酸结合。观察荧光标记出现的早晚,即可知道样品中是否含有病毒核酸。在这个过程中,使用的仪器是QPCR仪,同时进行反转录和PCR扩增,因此这种核酸检测方法称为RT-PCR(RT是指反转录、PCR是指扩增)。

④结果分析。结果为阳性,说明样品中病毒核酸含量多;结果为阴性,说明样品中不含或几乎不含病毒核酸。

而对于那些在自己不知情的情况下换上新冠后又康复的人,他们体内已经没有病毒,核酸检测一定是阴性的,但血液中的抗体却仍旧存在。因此可以通过抽血,检测人体内是否含有相应的抗体,从而确认这个人是否曾经感染、是否是近期感染。

 

 

(郑州人民医院检验科 仝静)

 

一文读懂核酸检测是怎样“揪出”病毒的

   2019年底暴发的新型冠状病毒世界大流行,导致新冠病毒(2019-nCoV)把病毒这一概念深深印刻在每个人的脑海里。连3岁的孩童都知道做核酸检测能够“揪出”新冠病毒。那么,我们就来一起探究一下其中的奥秘吧。

首先,了解一下什么是核酸?核酸是生物的遗传物质,通常分为DNA和RNA两种,而新冠病毒的遗传物质就是RNA。不同种类的生物、同种生物的不同个体,核酸一般都是不同的。利用核酸的这一特点,我们可以用DNA来鉴定罪犯的身份,或者用来进行亲子鉴定。也可以通过检测人体内是否含有新冠病毒的RNA来确定是否被感染。

关于核酸检测:目前发展最快的领域是分子生物学技术,特别是与病毒学有关的领域。分子方法不依赖于活病毒样病毒分离程序的存在,他们检测病毒基因组的一部分,使它们对病毒的检测更加敏感。核酸扩增技术,包括PCR、核酸依赖性扩增检测技术(NASBA)和劳伦斯·利弗莫尔微生物检测阵列 (LLMDA)等已被证明是对大多数已知病毒进行快速检测和分子鉴定的技术领先者。PCR的扩增因子为106,是一种极其敏感的检测技术。如用于流感病毒检测的实时RT-PCR检测比终点检测提供更快的结果,并且在许多情况下具有等于或优于培养的灵敏度。Corman等人实现了通过针对新型冠状病毒2019-nCoV的RNA基因组两个片段的引物进行实时RT-PCR检测。我们常做的核酸检测是RT-PCR法,就是常见的咽拭子采集检测。一般程序如下:

①取样。这应该是大家最熟悉的环节,通常使用棉签取咽拭子进行检测,因为新冠病毒主要感染呼吸道及肺部,咽部存在病毒的可能性较大,且取样方便快捷。实际上,必要的时候,医生还可以通过鼻拭子、肛拭子,或者取痰液、支气管灌洗液等标本进行取样,以便于获得更准确的结果。

②提取病毒RNA。取样之后,会使用一些化学物质如苯酚等,杀死可能存在的病毒,再通过抽提、离心等方法将RNA提取出来。

③RT-PCR。RNA不够稳定,检测过程中容易被破坏,所以需要将其反转录为相应的cDNA。再进行PCR扩增不断提高cDNA浓度,以便于仪器检测。扩增过程中,会加入带荧光标记的特殊探针,这些探针能够特异性地与病毒的核酸结合。观察荧光标记出现的早晚,即可知道样品中是否含有病毒核酸。在这个过程中,使用的仪器是QPCR仪,同时进行反转录和PCR扩增,因此这种核酸检测方法称为RT-PCR(RT是指反转录、PCR是指扩增)。

④结果分析。结果为阳性,说明样品中病毒核酸含量多;结果为阴性,说明样品中不含或几乎不含病毒核酸。

而对于那些在自己不知情的情况下换上新冠后又康复的人,他们体内已经没有病毒,核酸检测一定是阴性的,但血液中的抗体却仍旧存在。因此可以通过抽血,检测人体内是否含有相应的抗体,从而确认这个人是否曾经感染、是否是近期感染。

(郑州人民医院检验科 仝静)

 

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