菌种的保藏是无菌检验、微生物限度检验工作中的一项重要内容。用人工方法低温、干燥、缺氧、缺营养等方法控制微生物的代谢，使细胞基本上处于休眠状态，繁殖受到抑制但仍保持菌种原有的各种生物学特性，以达到保种的目的。菌种应放入专用冰箱，实行双人、双锁保管。菌种应有购入记录，传代记录，领用记录和销毁记录。菌种应定期检查、分离、纯化，以防菌种变异及衰退。那么，菌种的保方法及管理有哪些呢？下面小编给大家讲解一下。

常用菌种的保藏方法

1普通琼脂斜面  用于常用菌株的传代。在营养琼脂培养基内按0.5%加入琼脂粉配制而成。接种培养后，将菌种管用硅胶塞塞紧，置4℃冰箱保存，每隔2～3个月传种1次。铜绿假单胞菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡，其菌种须放25℃培养箱内保存。

2真菌琼脂斜面  用于真菌的传代。在真菌培养基内按1.3%加入琼脂粉配制而成。划线接种后，20～25℃培养24小时，置4℃冰箱保存，3～6个月传种1次。

3沙氏琼脂斜面  用于真菌的传代。配方：蛋白胨10g ，葡萄糖10g，琼脂粉13g，加蒸馏水1000mL，待上述成分溶化后，摇匀分装，115℃灭菌20分钟，趁热摆成斜面。划线接种后，20～25℃培养24小时，置4℃冰箱保存，3～6个月传种1次。

5440％甘油水  用于细菌的传代。配制方法：甘油40mL加水至100mL即成。分装至试管内，每支2mL左右，121℃灭菌20分钟备用。接种细菌后直接放4℃冰箱保存，6～12个月传代1次。

5需气菌、厌气菌培养基  用于生孢梭菌的传代。取生孢梭菌CMCCB64941菌液1mL至需气菌、厌气菌培养基15mL内，30～35℃培养18～24h，置4℃冰箱内保存3～6个月传种1次。

6 液氮超低温保藏法  适用于各类微生物的保藏。液氮温度可达-196℃，此时菌种的新陈代谢活动已停止，但不会死亡。在配制好的菌液内加10％甘油作为保护剂，分装于安瓿中，置液氮罐内可保存10年之久。

7冷冻真空干燥保藏法  本法广泛适用于各类微生物的保藏，包括病毒和噬菌体。将菌液混于有保护作用的介质内，分装于灭菌菌种管内，速冻后抽真空，使菌液很快变为疏松的干燥菌粉，最后在真空状态下密封管口，菌种保存期最长可达20年以上。

菌种的管理           

a.标准菌株:标准菌株应来自认可的国内或国外菌种保藏机构,其复苏、复壮或培养物的制备应按供应商提供的说明或按已验证的方法进行。

标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株。

b.标准储备菌辣:标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后,即为标准储备菌株。

标准储备菌株应进行纯度和特性确认。标准储备菌株保存时,可将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中,并分装于小瓶中,建议采用低温冷冻干燥、液氮贮存、超低温冷冻(低于 30℃)等方法保存。低于-70℃或低温冷冻干燥方法可以延长菌种保存时间。

c.工作菌株:标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的菌株为工作菌株。冷冻菌种一旦解冻转种制备工作菌株后, 不得重新冷冻或再次使用！

总之，同一菌株应选用两种或两种以上方法进行保藏；重要菌种应异地保存备份；菌种保藏设施应确保正常运行，设专人负责管理，定期检修维护；菌种保藏设施应备有备用电源，防止断电事故发生。

（郸城县人民医院检验科 李佼）