病理检测由原先的形态学为基础的检测，现在逐步进入到细胞和分子水平，即分子病理检测。分子病理检测主要包括费氏检测以及荧光定量PCR检测、一代基因测序、二代基因测序检测。荧光定量PCR检测主要为AM式方法，主要用于肺癌的EGFR和KRAS检测，用于指导肺癌患者的靶向治疗；一代基因测序和二代基因测序主要为NGS高通量测序的方法，能够评估的基因更多；分子病理检测，即DNA检测，也就是体内基因的检测，为肿瘤患者提供了更精准的治疗，可以明显延长患者的生存期。

分子病理是在DNA或者是RNA水平的检测与研究对于肿瘤的DNA或者RNA的检测方法有多种，常用的方法以及用途有几下几种：第一，PCR检测方法，这种方法可以检测目前已知的基因突变类型，如肺癌中的EGFR的基因检测。通过检测发现是否存在已知的突变类型，从而为靶向药物的选择，提供依据使肿瘤的治疗更加精准。第二，荧光原位杂交，也就是FISH检测方法。这种方法通常用来检测基因是否存在异位重排或者扩增，如乳腺癌或者胃癌中的HER2基因的检测如果发现有HER2基因扩增，就是应用靶向药物的适应证。此外FISH的检测也可以发现特异性的基因异位或重排，在多种软组织肿瘤中有重要作用，比如滑膜肉瘤中SYT基因的检测。第三，就是基因测序。这种方法也是用来发现基因是否存在突变从而为靶向药物的筛选提供依据。

个体化治疗目前已被公认是提高肿瘤患者生存期和生活质量的最佳途径。而制定个性化治疗方案、提高疗效，临床医生最需要精准的分子病理诊断报告。传统的以形态学为基础的组织学观察、免疫组化、透射电镜、免疫电镜等病理诊断技术所提供的信息已经远远满足不了精准医疗的需要。

一、目前常用的分子病理检测技术有：

原位杂交（ISH）

原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的外源核酸（即探针）与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。

荧光原位杂交（FISH）

FISH技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是：如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。

基因突变检测

基因突变检测在分子靶向治疗筛选适用人群中起决定性作用，如检测肺腺癌组织EGFR、KRAS基因突变，结直肠癌KRAS、BRAF、PI3K基因突变，胃肠道间质瘤（GIST）、c-KIT、PDGFRA基因突变，是选择易瑞沙、爱必妥、格列卫等分子靶向治疗药物的前提。

染色体异位检测

染色体异位是指2条非同源染色体同时发生断裂，所形成的断裂片段移至另一条染色体断端，并连接形成新染色体，常见于淋巴造血系统肿瘤及骨和软组织肉瘤中。由于染色体异位具有特异性，为非随机性，对肿瘤具有鉴别诊断意义。

二、目前临床应用的分子病理检测项目有：

1.肿瘤相关病毒感染检测：一些肿瘤与特定的肿瘤相关病毒感染关系密切，如人类疱疹病毒（EB病毒）与鼻咽癌、NK/T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤，高危型人乳头状病毒（HPV）与宫颈癌等，这些病毒的相关分子成分可通过分子生物学方法检测出来。

2.淋巴瘤基因重排及染色体易位：单克隆性淋巴细胞受体基因重排是淋巴系统肿瘤的典型特征，可通过PCR技术检测出来。同时，一些淋巴瘤亚型存在特定的染色体易位，可通过FISH、PCR等方法进行检测用于辅助鉴别诊断。

3.软组织肉瘤鉴别诊断：软组织肉瘤存在特征性的染色体易位，可通过FISH、RT-PCR等方法检测出来，用于鉴别诊断。

4.HER2、EGFR基因状态及ALK易位等检测：FISH检测HER2、EGFR基因扩增状态及ALK易位，可以指导乳腺癌、胃癌、肺癌患者进行靶向治疗。

5.EGFR、KRAS、c-KIT等基因突变检测：基因突变是指遗传物质发生的变异。研究表明，靶向药物的疗效与相关基因的突变情况有密切关系。针对临床应用的靶向治疗，目前开展的基因突变检测项目有非小细胞肺癌EGFR、KRAS基因突变检测，结直肠癌KRAS、BRAF、PIK3CA基因突变检测，胃肠道间质瘤c-KIT和PDGFRA基因突变检测等。

（河南省人民医院病理科 黄丽）