一部分人的认知受限，没能精准掌握荧光定量PCR的相关知识，导致不了解其具体使用的荧光化学类型，不利于提高认知效果。下面进行简单介绍，希望为更多人学习和应用相关知识提供帮助。

1.荧光定量PCR技术的内容

主要的内容是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后阶段则是借助标准曲线定量分析未知模板。

2.使用的荧光化学类型

经过细致分析和总结，能够发现荧光探针、荧光染料是比较常见的两种荧光化学类型，主要的原理如下。

（1）TapMan荧光探针：PCR扩增期间加入一对引物，同时还要加入一个特异性的荧光探针。这种类型的探针实际上是一寡核苷酸，将一个报告荧光集团、一个淬灭荧光基团分别标记在两端。在探针处于完整的状态时告知，报告基团发射的荧光信号就会被淬灭基团吸收。PCR扩增过程中，Tap酶的5,-3，外切酶活性能够将探针酶切降解，这样报告荧光团基和淬灭荧光基团就会分离，便于荧光检测系统接收相应的荧光信号。

（2）SYBR荧光染料。在PCR反应体系中加入过量的SYBR染料，并且SYBR荧光染料特异性低掺入DNA双链后，发射荧光信号，但是不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，对保证荧光信号的增加和PCR产物的增加完全同步具有重要意义。

3.荧光定量PCR的认识

（1）初阶认识。很多人会提出“为什么扩增判断要控制在80-300bp范围内？”这一问题。实际上，每一个基因的序列长短都存在差异，但是在设计引物期间只是要求产物的长度为800-300bp。如果出现太短或是太长的情况，就会发生不适合做荧光定量PCR检测的情况。

（2）进阶认识。考虑到诸多科研项目中利用荧光定量PCR技术的情况比较多，一定要保证具备共同的标准对荧光定量PCR实验进行衡量，避免发生结果存在较大差异的情况。荧光定量PCR技术比较靠谱，存在比较敏感和精准的特征。

（3）高阶认识。MIQE是用于发表关于实时定量PCR实验文章的一种最小信息，其中规定发表文章的时候需要提供的数据核查清单是其中十分关键的内容。实验设计过程需要遵循逻辑严密性原则，正确设定目标样本、参考样本、重复数量，保证实验数据具有较强的参考性和可比性。此外，也要重视“技术重复”方面的内容，主要就是避免操作上导致的误差而设计的重复实验，也是统一材料具体包括的复孔。通常情况下，处理和对照都有目的基因、参基因的重复设置，保证≥3个。

由此可见，荧光定量PCR的相关内容较多，通过对上述内容进行总结，让更多的人理解，为后续提高基因表达研究和转基因研究领域的应用效果创造条件，保证最终的研究结果具有精准可靠性。

（南阳市第一人民医院核医学科 袁洋）