在医学研究和分子生物学研究中荧光定量PCR技术已得到广泛应用，在实际应用中已经从病原体检测逐渐向其他方向拓展，经历过疫情的朋友们肯定对排长队，做核酸有着深刻的印象，而我们不陌生的核酸检测就是利用荧光定量PCR来确定样品中是否含有某一特定病原物。

1.何为荧光定量pcr

是一种分子生物学实验手段，在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，实时检测扩增反应中每一个循环产物的荧光信号，最后对未知模板使用标准曲线进行定量分析，主要用于检测特定核酸序列的拷贝数和表达水平。它可以用于多种疾病和生物标志物的检测。

2.荧光定量pcr的原理

主要分为两种，即荧光探针和荧光染料，前者使荧光发射基团和荧光淬灭基团分离，通过实现荧光信号的累积与pcr产物形成完全同步，进而实现定量， VIC, HEX、FAM、TET是目前常用的荧光基团。因增加了探针的识别步骤，所以有更高的特异性；而后者所选用的荧光染料的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，根据其信号能够检测出PCR体系存在的双链DNA数量，检验相对简便易行。

3.荧光定量pcr的临床应用

（1）病原体检测：可以用于检测病毒、细菌、真菌等病原体的核酸序列，从而确定感染的病原体种类和数量。与传统的检测方法相比优势明显，不仅取样少、灵敏度高，而且快速简便，能够对沙眼衣原体、解脲支原体、结核分枝杆菌、EB病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒等病原体进行定量测定。

（2）产前诊断：从孕妇的外周血中分离出胎儿DNA，能够减少病婴的出生，用于预防各类遗传性疾病的发生，属于无创性检查方法，孕妇易于接受。

（3）药物疗效考核：如PCR技术在HBV检测中能够了解患者体内现存的乙肝病毒数量、是否必要服药、有无传染性，传染性强度等，还能够判断病人适合使用哪类抗病毒药物，判断其治疗效果。

（4）肿瘤基因检测：虽然很多肿瘤的发病机制目前临床上并无准确推断，但是相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因，实时荧光定量PCR的应用不仅能够检测出已经突变的基因，还能够准确检测出癌基因的表达量，用于肿瘤ER基因、前列腺癌PSM基因、端粒酶hTERT基因等多种基因的表达检测。随着近年来与肿瘤相关的新基因被不断发现，荧光定量PCR技术在多种肿瘤的研究中均发挥更大的作用。

总之，荧光定量PCR具有快速、灵敏、定量等特点，是一种广泛应用于医学、生物科学、农业等领域的重要实验手段，为疾病的诊断、治疗和预防提供了重要的依据。

（南阳市第一人民医院核医学科 李洪飞）