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分子生物学技术在病原微生物检验中的应用 |
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分子生物学技术在病原微生物检验中的应用
□马青素 什么是分子生物学技术
随着生物技术的进步，人们对生物体的研究早已由生物体深入核酸和蛋白的分子水平上，这就为生物学和医学的各个领域提供了一个强有力的技术平台。分子生物学是一门基本的技术科学。主要从事RNA（核糖核酸）、DNA（脱氧核糖核酸）、蛋白质的结构、功能调节及对它们之间的联系和作用等进行研究，是一种新的微生物检测手段，通过这种手段，可以使检测对象更加广泛，检测结果更加准确。
分子生物诊断学的临床应用
病原微生物基因与人类感染性疾病 包括结核分枝杆菌、肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、SARS（传染性非典型肺炎）相关冠状病毒和人禽流感病毒等，对于这些病原生物基因和基因组的研究及耐药性机制的研究已成为分子诊断医学领域的主要内容。
单基因病 当致病基因核苷酸发生缺失、插入、倒位、易位、点突变等基因突变，并且这种突变改变了基因的编码序列或影响了基因的调控序列时，基因的功能发生异常导致的疾病，比如血红蛋白病、血友病、肌强直性营养不良等。
多基因病 多基因病的发病机制十分复杂，是遗传因素和环境因素共同作用导致的。这些病的发病有一定遗传基础，时常表现出家族倾向，但却又不符合一般的遗传方式。
肿瘤相关基因及恶性肿瘤 肿瘤的发生是由多种致癌因素综合作用的结果，与肿瘤发生相关的基因称为肿瘤相关基因，包括癌基因和抑癌基因。
线粒体变异与线粒体遗传病 线粒体DNA突变使线粒体功能发生障碍，直接影响人体组织和细胞的各种生物学功能，导致线粒体遗传病。它具有母系遗传、基因突变有阈值效应及多系统受累等遗传学特征。
宫颈细胞分子生物学 这就是查看女性宫颈部位是否有病变的情况，也就是TCT（新柏氏液基细胞学检测）及HPV（人乳头瘤病毒）之类的检查。主要是通过刷子刷女性宫颈部位的细胞，再把刷到的细胞进行检测。检测前应该保持阴道干净，避开月经期。在检查时，患者要放松心情，紧张的情绪不利于检查。
艾滋病分子生物学检测
分子生物学方法 随着生物技术的发展，核酸检测得到了人们的重视。它可以直接检查HIV（人类免疫缺陷病毒）、RNA，可在发现血清学变化之前检测HIV感染，而且比抗原检测方法灵敏。
聚合酶链反应检测法
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸3个基本反应步骤构成。
模板DNA的变性 模板DNA经加热至93摄氏度后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下一轮反应做好准备。
模板DNA与引物的退火（复性） 模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55摄氏度左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
实时荧光定量PCR技术 实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
（作者供职于濮阳市人民医院检验科）
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