□张振华

   近几年，由于受到饮食等因素的影响，结直肠癌的发病率以及患病人数呈上升趋势，给患者的生命健康带来了很大威胁。在结直肠癌的临床治疗中，大量临床实践证实，结直肠癌是由基因组不稳定造成的结果。引起结直肠癌发作的遗传因素，主要包括染色体不稳定和微卫星不稳定（MSI），其中80%~85%的结直肠癌由染色体不稳定引起，剩余15%~20%的结直肠癌则由微卫星不稳定引起。下面让我们一起来了解一下有关结直肠癌治疗中的微卫星不稳定检测。
什么是微卫星不稳定
    微卫星又称短串联重复，简单来说就是一种短而重复且长度＜10个核苷酸的DNA（脱氧核糖核酸）序列；一般来说，其主要由1个~6个核苷酸串联并重复排列而成。
    微卫星不稳定指的是在基因复制过程中，由于插入重复序列或缺失突变，使得微卫星片段长度出现了改变。
临床意义
    筛查及诊断林奇综合征 林奇综合征的诊断标准主要是MMR（错配修复）基因胚系突变。最新的临床研究表明，简化的临床标准、常规免疫组化检测再加上微卫星不稳定检查初筛，然后进行BRAF基因V600E突变及胚系基因突变检测，可大大提高林奇综合征的检出率。
    预测结直肠癌治疗效果 微卫星不稳定的结直肠癌患者与微卫星稳定的结直肠癌患者相比，前者临床标准较差，但预后效果更佳。
    一般来说在Ⅱ期结直肠癌患者的化疗中，常用氟尿嘧啶，而研究证实，微卫星稳定的结直肠癌患者能够在氟尿嘧啶辅助治疗中收益，但在MSI高的Ⅱ期结直肠癌患者的化疗中无益，出现这种情况的原因可能与错配修复缺陷有关。对于术后Ⅲ期结直肠癌患者，无论MSI状态如何，使用标准辅助化疗方案进行治疗，都能从中获益。
    微卫星不稳定状态与免疫治疗 最新研究证实，MSI高的转移性结直肠癌，对免疫检查点抑制剂治疗有良好的响应，主要是MSI高的肿瘤中有丰富的新抗原，可以进一步引起免疫反应。再加上MSI高的肿瘤，本就具有不稳定性和超突变性，检查点蛋白在这类肿瘤中的表达较高，通过靶向抑制检查点蛋白，可再次活化T细胞，进而让机体免疫系统灭杀肿瘤细胞，可见免疫治疗对MSI高的结直肠癌由良好的疗效和耐受性。
检测方法
    基因组中存在至少50万个微卫星，挑选哪些微卫星状态为标准仍是临床一大难题，目前临床上MSI检测方法主要有以下几种：
    PCR法 首先设置目标微卫星的引物，然后将肿瘤组织与正常组织同时进行PCR（聚合酶链反应）检测，观察肿瘤组织是否多出一个克隆片段；如果确定多出，就说明Marker（标志物）显示微卫星不稳定。
    免疫组化 MSI的主要原因是dMMR（错配修复缺失），因此可以对MMR相关蛋白进行间接的检测，从而对MSI状态进行推断。利用免疫组化对MLH1、MSH2、MSH6、PMS2的表达情况进行检测，从而对MSI情况进行推断。免疫组化简单易行，而且价格低廉，但是在具体的应用中也可能会漏掉一些其他MMR蛋白诱发的异常情况。
    测序法 目前，该检测方法具有理论上的可行性，但是没有得到广泛应用。现阶段，南京世和基因生物技术股份有限公司使用NGS（第二代测序）技术，推出了检测22个微卫星的方法，可以对MSI状态进行判定。
    总之，MSI检测在结直肠患者治疗中发挥着重要作用，不仅能对患者预后进行预测，还能为结直肠患者的临床治疗提供指导。因此，对于结直肠癌患者来说，接受MSI检测可以对病情有更准确的把控，以便得到有效治疗。
    （作者供职于安徽省宣城市宁国市人民医院肿瘤内科）